蛋白質(zhì)濃度的檢測是許多常規(guī)實驗流程的重要部分，它通常是樣品在進行電泳、色譜或其他分子生物學(xué)分析之前的必要步驟。引入自動化移液工作站，如 Opentrons Flex，不僅極大縮減了手動操作時間，使得實驗室能夠高效處理大批量樣本，而且還能建立一個標(biāo)準(zhǔn)化的操作流程，從而長期穩(wěn)定地輸出高質(zhì)量的測試結(jié)果。

Opentrons Flex 開發(fā)了三款針對常見蛋白質(zhì)定量方法的 protocol 協(xié)議：BCA 法蛋白質(zhì)檢測協(xié)議、Bradford 法蛋白質(zhì)檢測協(xié)議和 BCA 法肽段定量檢測協(xié)議，覆蓋了不同實驗需求。本篇應(yīng)用筆記將為大家展示 Opentrons 應(yīng)用科學(xué)家 Boren Lin 博士和 Kinnari Watson 博士，在 Opentrons Flex 上進行自動化蛋白質(zhì)定量分析實驗應(yīng)用驗證結(jié)果。

實驗設(shè)備

Opentrons Flex 自動化移液工作站

方法與結(jié)果

本實驗所涉及的操作流程是一個較通用的流程。實驗人員基于 Opentrons Flex 移液工作站進行編程，將工作試劑和測試樣品轉(zhuǎn)移到 96 孔透明平底板的各個孔中。試劑樣品混合物在 Opentrons 熱振蕩模塊上進行 30 秒混勻并孵育 30 分鐘。然后使用 BioTek Synergy H1 讀板器（Agilent Technologies, Santa Clara, CA）對結(jié)果板進行分析。

對于 BCA 法和 Bradford 法蛋白質(zhì)檢測實驗，實驗人員使用了 BSA 的 PBS 連續(xù)二倍稀釋液（2000 至 31.25 μg/mL，共 7 個稀釋梯度）作為測試樣品，PBS 緩沖液作為空白對照。
對于 BCA 法肽段定量檢測實驗，實驗人員使用試劑盒配套的肽段標(biāo)準(zhǔn)品（1000 至 15.625 μg/mL，共 7 個稀釋梯度）作為測試樣品。
對于涉及 BCA 法蛋白質(zhì)檢測或 BCA 法肽段定量檢測的實驗，自動化移液工作站首先根據(jù)待處理樣品的數(shù)量，通過移液和混合試劑 A 和 B，或試劑 A、B 和 C，準(zhǔn)備足夠的工作試劑。

此外，所有基于 BCA 法的檢測都需要在 37°C 下孵育以確保檢測的信號強度，而 Bradford 法蛋白質(zhì)檢測則在室溫下進行。

圖 1. 在 Opentrons Flex 上對 BCA 法（上）和 Bradford 法（中）蛋白質(zhì)檢測分別處理了各三組 8 個測試樣品（7 個 BSA 稀釋液和 1 個空白對照），并分別在 570 nm 和 600 nm 波長下進行吸光值重復(fù)讀數(shù)。對于 BCA 法肽段定量檢測（下），處理了三組 7 個肽段稀釋液和 1 個空白對照，并在 450 nm 波長下進行吸光值重復(fù)讀數(shù)。每種檢測方法均分別進行了兩次獨立的重復(fù)實驗。圖表中呈現(xiàn)的每個數(shù)據(jù)點是每個測試樣品重復(fù)測量的平均值，并根據(jù)各濃度的 3 個數(shù)據(jù)點計算對應(yīng) CV 值。

結(jié)果證實了使用 Opentrons Flex 進行 BSA 法蛋白質(zhì)檢測（圖 1，上）、Bradford 法蛋白質(zhì)檢測（圖 1，中）和 BCA 法肽段定量檢測（圖 1，下）的有效性。所有這些自動化流程都表現(xiàn)出了理想的樣品處理質(zhì)量和可重復(fù)性（CV <10%）。在手動布置實驗耗材和試劑后，整個實驗流程可實現(xiàn)完全自動化。根據(jù)這些自動化流程的時間預(yù)計，處理 96 個樣品的耗時將小于 1 小時。

結(jié)論

Opentrons Flex 的 protocol 協(xié)議可以使蛋白質(zhì)定量檢測的樣品處理步驟更加精簡以及流程化，不僅提高了實驗通量，同時減少了手動操作，并保證了測試結(jié)果的可靠性。